单克隆抗体 (mAbs) 在生物学研究和治疗应用中至关重要。从杂交瘤细胞株或单 B 细胞培养物中筛选和分离单克隆细胞对于产生具有特定抗原特异性的高质量 mAb 至关重要。96 孔板筛选单克隆细胞 是一种高效且通量大的方法，可筛选大规模的单克隆细胞，从而识别具有所需特性的候选细胞。

96 孔板筛选单克隆细胞涉及以下步骤：

• 将杂交瘤细胞或单 B 细胞稀释并分播到 96 孔板中，每个孔一个细胞。
• 培养细胞数天，形成分离的单克隆。
• 通过免疫酶联吸附试验 (ELISA) 或免疫荧光分析等检测方法评估每个孔中 mAb 的表达和特异性。
• 根据检测结果识别并筛选出阳性孔的单克隆细胞。

96 孔板的类型和涂层对筛选结果至关重要。无菌 96 孔板 可防止交叉污染。平底孔板 可用于显微镜观察，而V 形孔板 可用于液-液萃取。包被抗体或蛋白 A/G 的孔板 可用于捕获和检测特定的抗体。

单克隆细胞的培养条件必须优化，以获得最佳的生长和 mAb 表达。培养基的选择、添加剂和培养温度等因素会影响细胞增殖和 mAb 产量。定期监测细胞生长和 mAb 表达，并根据需要进行调整。

用于检测 mAb 表达和特异性的方法选择取决于抗体的目标和所需的特异性水平。ELISA 是一种通用方法，可用于定量测量抗体浓度和结合特异性。免疫荧光分析可用于可视化抗体与靶蛋白的相互作用。其他方法，如流式细胞术和表面等离子体共振 (SPR)，也可用于表征单克隆抗体。

通过检测方法识别阳性孔后，需要定位和筛选阳性孔中的单克隆细胞。这可以通过显微镜观察或微滴分配来实现。克隆分离技术，例如使用克隆环或平板印章，可用于将单克隆细胞转移到新的孔中或培养皿中，以进行进一步扩增和表征。

筛选出的阳性单克隆细胞应进行扩增和表征，以验证其稳定性和一致性。通过亚克隆化，可以建立产生所需抗体的稳定单克隆细胞系。应进行免疫学分析，如免疫印迹和中和试验，以深入了解抗体的特异性、亲和力和效力。

96 孔板筛选单克隆细胞是一种强大且通量大的方法，可用于从杂交瘤细胞株或单 B 细胞培养物中筛选和分离单克隆细胞。通过精心设计和优化筛选过程，研究人员可以有效地识别和筛选具有所需特性的单克隆细胞，为单克隆抗体开发和生物学研究奠定基础。